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Rhodophiala C. Presl (Amaryllidaceae) es un género de geófitas nativas de Sudamérica con un gran potencial ornamental por sus atractivas flores. La mayoría de las especies de este género son poco conocidas y tienen problemas de conservación. El objetivo de este estudio fue optimizar un proceso de micropropagación para sustentar el uso y preservación de tres especies nativas de Chile: R. montana (Phil.) Traub, R. splendens (Rengifo) Traub y R. ananuca (Phil.) Traub. Se evaluó la factibilidad de la implementación del cultivo en medio líquido y se determinó la influencia de diferentes sistemas de cultivo in vitro en la formación de brotes e incremento en biomasa de microbulbillos. Se ejecutaron tres experimentos. El primero determinó la influencia del tamaño del frasco y el volumen de medio Murashige y Skoog (MS), el segundo comparó medio MS líquido y sólido, y el tercero comparó un sistema de inmersión temporal (SIT), líquido estático, líquido en agitación y medio MS gelificado. Con frascos de 350 mL con volumen de medio de 50 mL se obtuvo un 100% de mayor peso fresco de bulbo que en frascos de 45 mL con volumen de medio de 10 mL. En medios gelificados, la hiperhidricidad afectó al 5% de los explantes, mientras que en medio líquido fue 16-40%. La supervivencia a la aclimatación alcanzó un 87-94% para plantas provenientes de medio gelificado; para las provenientes de medio líquido llegó a 38-69%. SIT permitió obtener mayor tasa de propagación (1,9 brotes en 30 días), comparado con medio líquido en agitación (1,0 brote) (P < 0,05) en R. ananuca. Los procedimientos presentados son apropiados para la conservación ex situ y el establecimiento de bancos de germoplasma.